LABORATOIRE JCD
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PROGRAMMATION DU CRYOLOGIC CL3300 ET CL 8800

Logiciel fournis (CD-ROM): CryoGenesis™ Software (CL3300, CL8800)
c User's guide
Drivers divers Microsoft*, Vista, Xp, W7....

-> Le PC doit être équipé d'un haut parleur (alarme)

La programmation permet d'établir ses propres courbes de congélation et de les sauvegarder.
On peut créer de multiples courbes en fonction des besoins et les modifier à la demande.

pour celà :

ALLER DANS L'ECRAN " PROTOCOLE MANAGMENT"

pour créer un nouveau programme on va généralement sur un programme type de la base de données et on le modifie en fonction des besoins. avec les touches : "delete", "insert", "cancel" et "Edit"
Sa sauvegarde (touche "SAVE") se fait en lui attribuant un nom "explicite".

UN PROTOCOLE COMMENCE TOUJOURS PAR L'INDICATION DE LA TEMPÉRATURE DE DÉPART :

Commande "START TEMP"
Cette température est habituellement la température à laquelle on commence la procédure, une fois les paillettes introduits dans la cryochambre. Une fois atteinte, on procédera au lancement du programme en cliquant sur "RUN" de l'écran "JOB-CONTROL"

Commande "RAMP"
Cette commande permet de préciser:
1 : la pente de la courbe (RATE)en °C/mn -> ex: 0.30
2 : la température finale à atteindre pour cette commande (TARGET TEMP.) en °C. -> ex : - 6°C
NB : Cette commande peut être utilisée plusieurs fois pendant un même programme

Commande "HOLD TIME"
Cette commande permet de préciser la période pendant laquelle la dernière température connue doit être maintenue
Elle peut être utilisée en fin de programme ou plusieurs fois dans un même programme

Commande " FREE FALL"
En fin de programme on peut demander au programmateur :
- de maintenir une température fixe, jusqu'à ce que l'opérateur intervienne manuellement pour plonger les paillettes dans l'azote liquide (HOLD TIME)
Ou de faire une descente en température en chutte libre jusqu'à -120à -150°C., avant d'intervenir manuellement

Commande "BELL & PROMPT"
Cette commande permet de programmer un signal sonore, pour un seeding ou une fin de programme par exemple.
On peut attribuer une information écrite à l'écran qui devra être validé par OK.
NB : Cette commande peut être utilisée plusieurs fois pendant un même programme

Commande "END" ou "FINAL STATE
cette action est celle de sortie du programme, elle est utilisée soit avec la commande "HOLD" soit avec la commande "FREE FALL"


PROGRAMMATION : EXEMPLE

PROTOCOL EDITOR

STEP TYPE DESCRIPTION
1 START 24°C.
2 RAMP RAMP TO -5.0 °C AT 2 .00 °C/MIN.
3 RAMP RAMP TO -10.0 °C AT 5.00 °C/MIN.
4 BELL & PROMPT BELL & PROMPT WITH «  TEXTE D’INFORMATION »
5 HOLD HOLD -10.0 °C FOR 2.0 MIN.
6 RAMP 6 RAMP TO -30.0 °C AT 5 .00 °C/MIN.
7 RAMP RAMP TO -60.0 °C AT 4 .00 °C/MIN.
8 HOLD HOLD -60.0 °C FOR 2.0 MIN.
9 BELL & PROMPT BELL & PROMPT WITH «  TEXTE D’INFORMATION »
10 END FINAL STATE FREE FALL FROM -60.0 °C.

 

REGLES A RESPECTER POUR ECRIRE UN PROGRAMME (descente en température)

Les vitesses de descente en température sont lièes à l'inertie du sytème.les tableaux suivants vous donnent les pentes maxima utilisables en fonction du type de CRYOCHAMBRE (VIDE) que vous utilisez.
NB : Les performances sont un peu plus faibles avec une cryochambre pleine de paillettes.
Cryochambre habituellement utilisée pour l'utilisation des paillettes hautes sécurité : réf. Cryologic CC20F (20 paillettes H.S, procédure"Fast")

 

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PROCÉDURES DE CONGELATION PROGRAMMÉE avec les appareils CRYOLOGIC

Paillette Haute sécurité :
La procédure de remplissage est la même mais en utilisant l'embout spéciale qui permet de remplir la paillette sans mouiller la partie à souder.
Souder la paillette côté remplissage, introduire le jonc d'identification puis souder le paillette côté identification.
Remettre ensuite la paillette dans le sens vertical, avant de l'introduire dans le congélateur.

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Le 20-slot Core est celui qui est utilisé pour les paillettes haute sécurité (avec soudure des embouts)



PRÉPARATION DU CL 8800

cMode d'emploi CL8800 en MODE MANUEL
(à faire avant le montage des paillettes)

1 - Mettre la cryo-chambre dans l'enceinte isolente remplir l'enceinte avec de l'azote liquide.

2 - Selectionner le bon protocole au moyen des poussoir "+" et "-" de l'option "Select" (1)

3 - Allumer l'appareil et mettre le bouton "°C / MN sur la position "°C"

4 - Mettre le bouton (3) sur l'option "HOLD"

5 - appuyer sur le bouton "reset" (2) et attendre que la température de début de protocole soit atteinte.
Sur les appareils les plus récents il faut appuyer 3 foid de suite dans un délai de 6 secondes , il y a alors une validation par bip sonore.

6 - disposer les differents echantillon dans la cryo-chambre.

7 - Appuyer sur "RUN" pour démarrer la procédure.
* - Mettre l'alarme sur "Audible" pour être averti de la phase de "seeding"

7 - Appuyer sur "RUN" pour démarrer la procédure.
* - Mettre l'alarme sur "Audible" pour être averti de la phase de "seeding"

(* - Manoeuvre "Hold- Run" : Quand, en cours du processus on retourne sur l'option (3) "HOLD" le controleur de température maintient la température indiquée
jusqu'à ce qu'on repasse en protocole "RUN". l'appareil reprend ainsi la suite de son programme normalement. Cette manoeuvre peut être intéressante quand il y a un seeding à faire sur de nombreux échantillons.)


cMode d'emploi CL8800 en Mode PILOTAGE PAR PC
(à faire avant le montage des paillettes)

Attention le PC doit être muni d'un haut parleur pour que l'alarme puisse fonctionner : (seeding ou fin de procédure).

- Allumer l’appareil (interrupteur général derrière l’appareil puis vérifier la position des témoins lumineux, comme suit :
Pour les appareils récents "ext" est remplacé par "PC"


 

PREPARATION DU CONGELATEUR CL 3300 et CL 8800

a a
- Remplir le CRYOBATH avec l’azote liquide.

Choix de la CUVE en fonction de son autonomie :
c
Petite : autonomie : 1h30 app.. - grande : autonomie : 3h app.

Mettre le couvercle sur LA CRYOSTAT
PUIS descendre doucement LE CRYOSTAT dans l'azote liquide.
En fin d'ébulition, remettre eventuellement de l'azote liquide jusqu'à 2 cm env.du couvercle.

CONFIGURATION (voir pdf)

- sur le PC, Appeler le programme « cryogenesis ».
- Remplir les champs, selon UN PROTOCOLE À ÉTABLIR, par exemple :
CLIENT : nom et prénom de madame
FIELD 1 : nom et prénom de monsieur
FIELD 2 : N° d’ordre (de page) dans le cahier de congélation à pages numérotées
NOTE : N° des paillettes, ex : 05001.NOR.01.3 avec :

05……..= année
001……= N° de la page dans le cahier à pages numérotées
NOR.….= 3 premières lettres du nom
01……..= paillette 1 ou 2 ou 3…. Pour la congélation en cours
3…….…= nombre d’embryons dans la paillette

- On peut aussi mettre des informations dans le champ : COMMENTAIRE.


case « PROTOCOLE » cliquez sur load et choisir le protocole désiré.

- appuyer sur START JOB (pavé rouge en haut à droite) Une autre fenêtre apparait
en bas de cette fenêtre on peut alors lire la température immédiate.
Quand celle ci est égale à la température programmée, mettre les paillettes dans le bloc de régulation
remettre le couvercle de la cryochambre et du cryobath et appuyer sur « RUN »
le programme démarre et on peut suivre l'évolution du processus sur l'écran du PC.


En cas de SEEDING :- tremper un écouvillon ou un objet métalique dans l’azote liquide 10 à 15 secondes. Sortir le haut de la paillette
jusqu’au ménisque inférieur de la bulle d’air supérieure.

- Faire le seeding par contact sur la paillette (apparition cristaux à cet endroit) et replonger la aussitôt dans son habitacle.
- valider l’opération sur l’ordinateur. (OK)

Si besoin, Vérifier très rapidement, après 2 minutes, qu’il y a progression de la prise en glace dans la paillette.

Compléter la cuve d’azote jusqu’en haut et laisser le processus se poursuivre, si besoin, jusqu’à la température finale (- 150°C).
quelques minutes Avant d’atteindre la température finale, préparer un récipient contenant de l’azote liquide sur une hauteur
de quelques centimètres et plonger ensuite rapidement la paillette dedans. Après arrêt de l’ébulition de l’azote, stocker la
paillette dans son container définitif.


=> PROTOCOLE - congélation du sperme avec cryologic 3300 ou 8800 :
Références : WHO/OMS - 5ème édition (2010) p. 174

Après dilution du sperme dans le milieu de congélation, préparer les paillettes, et les Mettre dans le CRYOSTAT

Attendre que la température de dépard soit à 20 °C. et les Mettre dans le CRYOSTAT.
Déclencher le programme --> RUN

STEP TYPE DESCRIPTION
1 START 20°C.
2 HOLD HOLD 20.0 °C FOR 1.0 MIN.
3 RAMP RAMP TO -6.0 °C AT 1.50 °C/MIN.
4 HOLD HOLD -6.0 °C FOR 1.0 MIN.
5 RAMP RAMP TO -80.0 °C AT 6 .00 °C/MIN.
6 HOLD HOLD -80.0 °C FOR 2.0 MIN.
7 BELL & PROMPT BELL & PROMPT WITH «  plonger dans l'azote liquide »
8 END FINAL STATE FREE FALL FROM -80.0 °C.





PROCÉDURE DE VITRIFICATION AVEC LE CVM KIT CRYOLOGIC

VOIR LES VIDEOS (Anglais) :Vidéo 1 - Vidéo 2 - Vidéo 3 - Vidéo 4



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