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Dénudage des ovocytes – fiv conventionnelle

Il existe plusieurs façons d' effectuer le dénudage des ovocytes :

1- En utilisant des « cones jaunes stériles » pour pipette automatique, par passages succéssifs des ovocytes à dénuder dans le cône, en aller-retour. Cette technique est bien souvent insuffisante pour arriver à un résultat parfait.

2- En utilisant des pipettes Pasteur finement effilées par étirement à la flamme d’un bec à alcool puis terminée par fusion du verre de l’extrémité en petite boule. Ces pipettes boutonnées ont l’avantage d’être fabriquées à façon, plus ou moins souples, et stérilisées
lors de leur fabrication. Elles permettent une décoronisation efficace en les utilisant tangantiellement par petit coups autour de l’ovocyte à décoroniser mais elles demandent une grande habitude pour ne pas lèser les ovocytes.

3- Ou mieux, En utilisant des embouts calibrés en Teflon ou en verre

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Ensemble "pipeteur-embout calibré" à usage unique et stérile. les embouts sont en teflon et comporte un orifice de 150, 135 ou 125 micrométres, conçus et parfaitement adaptés pour ce travail particulier.

 

4-    L’utilisation d’une technique rapide (1 ou 2) associée en finale à une décoronisation fine par stripper de 135 micromètres(3) permet de travailler rapidement.

En cas de dénudage difficile (réseau en toile d’araignée ou magma important autour de l’ovocyte, on pourra procéder comme suit :

A – Prendre une boîte de Petri pour culture cellulaire et graver sur le fond de la boîte un reseau de lignes parallèles puis perpendiculaires
en utilisant un aiguille stérile à prélèvement sanguin de 0.9x25mm (ou 20Gx1’’).
Pour mieux maitriser la gravure du fond de la boite enmancher l’aiguille à prélèvement sur une seringue à injection de 1 ml.
Plusieurs dessins peuvent être fait de la même manière dans la même boîte, le but étant   de créer des aspérités en reseau pour retenir
les dépôts cellulaires.
Mettre du milieu de culture équilibré, à 37°C sur l’ensemble.
B - Sortir l’ovocyte de son milieu avec le moins de matériel cellulaire possible.
et le déposer en appuyant légèrement pour que  l’ensemble se fixe dans un des reseaux déssiné au fond de la boite.
C – Dégager l’ovocyte avec une pipette boutonnée (confectionnée en 2).

D – remettre aussitôt l’ovocyte dans son milieu de culture définitif avant de recommencer l’opération avec un autre ovocyte.



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