Procédure de congélation
Utilisation du CL 8800
Verifier la température de démarrage du programme sur le CL8800.
Paillette classique :
Rincer la paillette de congélation avec la solution de montage sans aller jusqu'au coton
Monter la paillette selon le schéma suivant, en maitrisant la position des embryons vers le bas dans la colonne liquide qui les contient ( à cause du seeding).
Paillette Haute sécurité :
La procédure de remplissage est la même mais en utilisant l'embout spéciale qui permet de remplir la paillette sans mouiller la partie à souder.
Souder la paillette côté remplissage, introduire le jonc d'identification puis souder le paillette côté identification.
Remettre ensuite la paillette dans le sens vertical, avant de l'introduire dans le congélateur.
PREPARATION DE CL 8800
(à faire avant le montage des paillettes)
 Mode d'emploi en Mode Manuel
1 - Mettre la cryo-chambre dans l'enceinte isolente remplir l'enceinte avec de l'azote liquide.
2 - Selectionner le bon protocole au moyen des poussoir "+" et "-" de l'option "Select" (1)
3 - Allumer l'appareil et mettre le bouton "°C / MN sur la position "°C"
4 - Mettre le bouton (3) sur l'option "HOLD"
5 - appuyer sur le bouton "reset" (2) et attendre que la température de début de protocole soit atteinte.
Sur les appareils les plus récents il faut appuyer 3 foid de suite dans un délai de 6 secondes , il y a alors une validation par bip sonore.
6 - disposer les differents echantillon dans la cryo-chambre.
7 - Appuyer sur "RUN" pour démarrer la procédure.
* - Mettre l'alarme sur "Audible" pour être averti de la phase de "seeding"
7 - Appuyer sur "RUN" pour démarrer la procédure.
* - Mettre l'alarme sur "Audible" pour être averti de la phase de "seeding"
(* - Manoeuvre "Hold- Run" : Quand, en cours du processus on retourne sur l'option (3) "HOLD" le controleur de température maintient la température indiquée
jusqu'à ce qu'on repasse en protocole "RUN". l'appareil reprend ainsi la suite de son programme normalement. Cette manoeuvre peut être intéressante quand il y a un seeding à faire sur de nombreux échantillons.)
Mode d'emploi avec pilotage par PC
et logiciel « cryogenesis »
Attention le PC doit être muni d'un haut parleur pour que l'alarme fonctionne : (seeding ou fin de procédure).
- Allumer l’appareil (interrupteur général derrière l’appareil puis vérifier la position des témoins lumineux, comme suit :
Pour les appareils récents "ext" est remplacé par "PC"
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PREPARATION DU CONGELATEUR
- Remplir le bac de congélation avec de l’azote liquide (mettre lunettes)
- Procéder à la préparation de la cuve de congélation (remplir avec l’azote liquide)
- sur le PC, Appeler le programme « cryogenesis ».
Choix de la CUVE en fonction de son autonomie :
Petite : autonomie : 2 h. - grande : autonomie : 4 heures
CONFIGURATION
- Remplir le bac de congélation avec de l’azote liquide (mettre lunettes)
- Procéder à la préparation de la cuve de congélation (remplir avec l’azote liquide)
- sur le PC, Appeler le programme « cryogenesis ».
- Remplir les champs, selon votre convenance par exemple :
CLIENT : nom et prénom de madame
FIELD 1 : nom et prénom de monsieur
FIELD 2 : N° d’ordre (de page) dans le cahier de congélation à pages numérotées
NOTE : N° des paillettes, ex : 05001.NOR.01.3 avec :
05……..= année
001……= N° de la page dans le cahier à pages numérotées
NOR.….= 3 premières lettres du nom
01……..= paillette 1 ou 2 ou 3…. Pour la congélation en cours
3…….…= nombre d’embryons dans la paillette
- On peut aussi mettre des informations dans le champ : commentaire.
case « JOB TYPE » cliquez sur load, il s’inscrit dans la case « congélation d’embryons »
case « PROTOCOLE » cliquez sur load et choisir le protocole désiré.
- appuyer sur START JOB (pavé rouge en haut à droite) Attendre que les paillettes soient prêtes et que le congélateur
soit à la température de départ (20°c.)
- quand la température est stabilisée, mettre les paillettes et appuyer sur « RUN »
SEEDING :- tremper l’écouvillon dans l’eau puis dans l’azote liquide 10 à 15 secondes. Sortir le haut de la paillette
jusqu’au ménisque inférieur de la bulle d’air supérieure.
- Faire le seeding par contact sur la paillette (apparition cristaux à cet endroit) et replonger la aussitôt dans son habitacle.
- valider l’opération sur l’ordinateur. (OK)
Vérifier très rapidement, après 2 minutes, qu’il y a progression de la prise en glace dans la paillette.
Compléter la cuve d’azote jusqu’en haut et laisser le processus se poursuivre, si besoin, jusqu’à la température finale (- 150°C).
quelques minutes Avant d’atteindre la température finale, préparer un récipient contenant de l’azote liquide sur une hauteur
de quelques centimètres et plonger ensuite rapidement la paillette dedans. Après arrêt de l’ébulition de l’azote, stocker la
paillette dans son container définitif.
=> Protocole - congélation d'embryons :
1 - Température de départ stabilisée : 20 °C
2 - Descente en température à raison de 2°C par minute jusqu'à - 6 ou - 7°C. selon les réactifs utilisés
3 - attendre 5 minutes à la température du seeding (hold)
4 - Déclencher l’ ALARME pour faire le seeding dès que la température est atteinte.
5 - Maintien de la température à - 6 ou -7°C. 9 minutes, après le seeding .
6 - Descente de 0,3°C.par minute jusqu’à – 45°C./-70°C selon votre choix.
8 - puis chutte libre de la température ou Plonger les paillettes , d'un seul coup dans l'azote liquide et laisser les dedans quelques minutes avant de les transférer dans leur lieu de stockage définitif.
 Seeding
Rapport de congélation (CL8800)
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