LES METHODES DE CULTURE en F.I.V.

Culture en boîte à l'air libre
Pour ce type de culture on peut utiliser les boites NUNC* à 4 puits qui se prêtent bien aux manipulations.
Il existe aussi, sur le marché européen des boites à 5 puits MINITUBE*, plus basses qui permettent une meilleure organisation du
travail, voire l'économie d'une boîte supplémentaire dans de nombreuses situations.

boite NUNC*4, puits------boite MINITUBE*, 5 puits,

Ce type de culture décharge l'utilisateur des petits problèmes d'utilisation liés à la présence d'huile et évitent les lavages
supplémentaires
qu'elle occasionne.
Leur utilisation demande toutefois un travail rapide pour ne pas occasionner des variations importantes de pH .
Le volume raisonnable de milieu de culture à utiliser est de l'ordre de 600 à 900 microlitres par cupule.

Culture en boîte, sous huile

Minéral oil ferticult Nidoil Nidacom

Utilisation des huiles pour culture cellulaire : Conservation : température ambiante à l'abri de la lumière Utilisation : par fraction, après équilibration en phase aqueuse (solution saline tamponnée) à 37°C.sous CO2. au moins 24 h.

Pour la culture "en goutte", Il existe une différence notable entre les 2 marques de boites quand on veut travailler
sous huile:
la boite NUNC*, nouveau revêtement, semble avoir un pouvoir mouillant très faible, ce qui exclue de pouvoir travailler
avec des microgouttes très petites qui auront tendance à se sphériciser sous huile et rouler dans la boîte.
Elles seront donc réservées pour les cas où l'on utilise des gouttes d'un volume de l'ordre de 80 à 300 microlitres




*NUNC* et MINITUBE* sont des marques et modèles déposés.

boite NUNC*, sous huile-----boite MINITUBE*, sous huile

Les boites MINITUBE* semblent mieux adaptées aux cultures en microgouttes (de 10 à 50 microlitres ou plus) car le pouvoir
mouillant des revêtements utilisés le permet.

Culture en boîte de pétri sous huile
Méthode économique par excellence, ce type de culture demande, bien sûr, des boîtes de Pétri qualité "culture cellulaires".
Elles peuvent servir en beaucoup de circonstances, pour des actions ponctuelles (lavage, décoronisation...) ou pour la culture
en microgouttes.
Après la phase de fécondation, La tendance, aujourd'hui est de regrouper de 2 à 4 ovocytes de qualité équivalente dans chaque
microgoutte.

boite de Pétri, sous huile

On pourra ainsi mettre les ovocytes à 2 PN ensemble, ainsi que les embryons à croissance rapide (2 cellules à 24 h. après mise en fécondation.
Il en sera de même pour les cultures embryonnaires au delà de J2 : les embryons de grade différents pourront être regroupés par
classe.
Toutefois leur manipulation en va et vient est plus délicate, car ces boîtes ne sont pas compartimentées.

Standardisation des boites sous huile
La culture en goutte sous huile nécessite un certain nombre de règles, lorsque l'on travaille à plusieurs dans un laboratoire d'AMP :
- Les gouttes doivent avoir un volume mesuré le plus constant possible et disposées selon un ordre pré-établi.
- A cet effet une emprunte en papier plastifié que l'on glisse sous la boîte à remplir, peut servir de guide, pour préparer toutes les
boîtesd'une manière identique ce qui facilitera les opérations de reprise d'un travail en cours par une autre technicienne.
De cette manière le volume de recouvrement des gouttes par l'huile sera constant et mesuré lui aussi